Affiliation:
1. Abteilung für Biotechnologie und Enzymkatalyse Institut für Biochemie Universität Greifswald Felix-Hausdorff-Str. 4 17487 Greifswald Deutschland
2. Bio Pharmaceuticals R&D AstraZeneca Pepparedsleden 1 43183 Mölndal Schweden
Abstract
AbstractDie enzymkatalysierte Funktionalisierung (engl.: late‐stage functionalization (LSF)), wie z. B. die Methylierung von Arzneimittelmolekülen und Leitstrukturen, ermöglicht den direkten Zugang zu wirksameren pharmazeutischen Wirkstoffen (API). S‐Adenosyl‐l‐Methionin‐abhängige Methyltransferasen (MTs) können eine Schlüsselrolle bei der Entwicklung neuer Wirkstoffe spielen, da sie die chemo‐ und regioselektive Methylierung von O‐, N‐, S‐ und C‐Atomen katalysieren und damit den herkömmlichen chemischen Wegen überlegen sind. Um geeignete MTs zu identifizieren, haben wir einen kontinuierlichen fluoreszenzbasierten Hochdurchsatzassay für SAM‐abhängige Methyltransferasen entwickelt, der das Screening unter Verwendung von E. coli Zelllysaten erleichtert. Dieser Assay besteht aus zwei enzymatischen Schritten für die Umwandlung von S‐Adenosyl‐l‐Homocystein zu H2S, was zu einer selektiven Fluoreszenzmessung durch Reduktion eines Azidocoumarin‐Sulfidsensors führt. Die Untersuchung von zwei O‐MTs und einer N‐MT bestätigte, dass dieser Assay für die Bestimmung der Methyltransferase‐Aktivität in E. coli Zelllysaten geeignet ist.
Funder
Deutsche Forschungsgemeinschaft